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1262-S压力蒸汽灭菌生物指示剂

1262-S压力蒸汽灭菌生物指示剂

压力蒸汽灭菌生物指示剂
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根据不同灭菌工艺可选择相对应的适用的生物指示剂。

1、湿热灭菌法

湿热灭菌法指将物品置于灭菌柜内利用高压饱和蒸汽、过热水喷淋等手段使微生物菌体中的蛋白质、核酸发生变形而杀灭微生物的方法。灭菌能力强,为热力灭菌中最有效、应用最广泛的灭菌方法。湿热灭菌法最常用的生物指示剂为嗜热脂肪芽孢杆菌孢子,如NCTC10007、NCIMB8157、ATCC7953。D值为1.5~3.0min,每片(或每瓶)活孢子数5×105~5×106个,在121℃、19min下应被完全杀灭。此外,还可使用生孢梭菌孢子如NCTC8594、NCIMB8053、ATCC7955,D值为0.4~0.8min。

2、干热灭菌法

本法系指物品置于干热灭菌柜、隧道灭菌器等设备中,利用干热空气达到杀灭微生物或消除热源物质的方法。

干热灭菌法最常用的生物指示剂为枯草芽孢杆菌孢子,如NCIMB8058、ATCC9372。D值大于1.5min,每片活孢子数5×105~5×106个。去热原验证时使用大肠杆菌内毒素,加量不小于1000细菌内毒素单位。

3、辐射灭菌法

指将灭菌物品置于适宜放射源辐射的γ射线或适宜的电子加速器发生的电子束中进行电离辐射而达到杀灭微生物的方法。最常用Co60射线辐射灭菌。

辐射灭菌法最常用的生物指示剂为短小芽孢杆菌孢子,如NCTC10327、NCIM10692、ATCC27142。每片活孢子数5×105~5×106,置于放射剂量25kGy条件下,D值约3kGy。但应注意灭菌产品中所负载的微生物可能比短小芽孢杆菌孢子显示更强的抗辐射力。因此短小芽孢杆菌孢子可用于监控灭菌过程,但不能用于灭菌辐射剂量的建立。

4、气体灭菌法

指化学消毒剂形成的气体杀灭微生物的方法,常用的化学消毒剂有环氧乙烷(EO)、气态过氧化氢、甲醛、臭氧等,适用于在气体中稳定的物品灭菌。

环氧乙烷灭菌最常用的生物指示剂为枯草芽孢杆菌孢子,如NCTC10073、ATCC9372。

气态过氧化氢灭菌最常用的生物指示剂为嗜热脂肪芽孢杆菌孢子,如NCTC10007、NCIM8157、ATCC7953。每片活孢子数1×105~5×106个。

环氧乙烷灭菌中,枯草芽孢杆菌孢子D值大于2.5min,在环氧乙烷浓度为600mg/l,相对湿度为60%,温度为54℃下灭菌,60min应被杀灭。

5、过滤除菌法

利用细菌不能通过致密微孔滤材的原理以除去气体或液体中的微生物的方法。

过滤除菌法最常用的生物指示剂为缺陷假单胞菌(ATCC19146),用于滤膜孔径为0.22um的滤器;黏质沙雷菌(ATCC14756),用于滤膜孔径为0.45um的滤器。

一般情况下选择生物指示剂要满足两个原则

标准化菌株与合乎要求的抗力。

举例来说,实际生产过程中发现菌株的D值最高不超过0.8,如果选择选择0.8~1.5之间的   ( Clostridiumsporogenes;ATCC7955)生孢梭菌为生物指示剂进行验证就不合适,因为在0.8的点上不能将微生物完全杀灭。因此,选择的生物指示剂的D值范围的最小值应大于实际菌株的D值得最大值时,才能确保微生物被完全杀灭,以确保无菌。同时,所选指示生物的kill time要略低于工艺灭菌时间最为适宜。

常用的生物指示剂有(嗜热脂肪芽孢杆菌)  Bacillusstearothermophilus、Clostridium Sporogenes(生孢梭菌)、Bacillus subtilis (枯草芽孢杆菌)、Bacilluscoagulans(凝结芽孢杆菌)等菌种的孢子。不论采用何种验证菌株,参照USP,对湿热灭菌(121℃)的工艺验证用菌株均应证明“具备合乎要求的抗力”;通常应满足以下要求:D值在1.5~3.0之间;存活时间在4.5~14.0min之间;完全杀灭时间在 13.5~32.0min之间。

在不明确生产过程中菌株D值的情况下应选择为目前业界常用的生物指示剂,不宜盲目选择新的指示剂。自美国NIH于1955年使用嗜热脂肪芽孢杆菌制备生物指示剂开始,由于该菌的孢子无致病性、无热原、无毒,对压力蒸汽的抵抗力在大多数微生物表现强势等原因,嗜热脂肪芽孢杆菌孢子(ATCC 7953)已成为目前验证湿热灭菌程序的最常用的生物指示剂。采用该菌株进行灭菌工艺验证通常不再需要企业提供连续两年的微生物环境监测结果。验证过程通常为将一定量已知耐热性的孢子接入产品中,用设定的灭菌程序灭菌,以确认设定的灭菌工艺是否符合标准。由于部分产品可能会增加微生物的耐热性或可能会杀灭微生物或与之不相容等情况,当产品杀灭或与菌种孢子不相容时,可考虑使用生理盐水或与产品相似的溶液替代产品进行验证。因此在灭菌程序之前了解生物指示剂在产品或替代产品中的耐热性是必要的。


 

 

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